对于猪蓝耳病您是不是就知道抗体检测?PRRS实验室检测,不常接触的领域

猪病防治对于猪蓝耳病您是不是就知道抗体检测?PRRS实验室检测,不常接触的领域已关闭评论

猪生殖与呼吸综合征(PRRS)是世界范围内一种严重危害养猪业的传染病,临床症状表现为生产母猪的繁殖障碍以及各种阶段猪的呼吸症状。繁殖障碍表现为受孕率下降、妊娠后期流产、产死胎、木乃伊胎与弱仔。虽然PRRS病理上表现出间质性肺炎的变化,但猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后引起的病理及组织学变化往往不太典型,而且容易与其它病原感染所引起的病理变化相混淆。因此PRRS的确诊有赖于实验室诊断。

通过实验室方法,可以将PRRSV感染与猪瘟病毒、伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、血球凝集性脑脊髓炎病毒、猪肠道病毒、猪流感病毒、猪巨细胞病毒、以及钩端螺旋体等病原感染区别开。

1、PRRS诊断注意事项

PRRSV的分离或检测的成功率取决于样品处理是否正确。一般来说,用于病毒分离的样品应尽可能在发病的早期采取,最好在发病开始的7-10天内,急性发病期样品病毒含量较高,而后期采取的样品往往容易得出可疑甚至阴性的结果。用丁二病毒学检验的样品也需要足量的初始样品。无菌采取新鲜样品并立即送往实验室进行病毒分离。如果不能马上送到实验室,则可在4℃冷藏保存不超过2天,如果需要保存较长的时间的话,则应保存于-70℃,但不要长期置于-20℃,注意不要反复冻融,在样品运送过程中最好使用干冰。

通过检测猪群血清的阳转或者测定PRRSV特异抗体滴度的上升同样可以用于PRRSV感染的诊断。针对以往有过感染史或已经注射了疫苗的猪群,血清学结果的判定应该慎重。因为到目前为止,任何一种血清方法还无法区分血清学的阳性结果是由野毒感染还是由于疫苗免疫所引起。另外,血清学方法也无法确定猪群感染的时间,只有将血清学结果与流行病学如病例对照实验结合起来才能做出准确的判断。当对某个猪群进行调查诊断时,有必要将其它的方法如PCR或病毒分离与血清学结果综合起来,这样才能对生产实践中PRRS的传播特点有个清晰的了解。

2、检测PRRS病毒的方法

2.1 病毒分离

PRRSV仅能在两类细胞上复制,猪肺泡巨噬细胞(PAM)以及特定的非洲绿肾细胞系。然而,所有的PRRSV分离毒株不能同时在这两类细胞上复制。这就意味着在进行病毒分离时应该尽可能利用两类细胞,在分离欧洲型毒株时应尽可能用PAM。文献报道PRRSV可以从各种临床样品中分离到,包括血清、血浆、外周血单核细胞、骨髓、扁桃体、肺脏、淋巴结、胸腺、脾脏、心、脑、肝、睾丸、副睾、输精管、尿道球腺、阴茎组织、口咽拭子、鼻甲、鼻拭子、胎盘、唾液、尿液、粪便以及精液中。如果怀疑感染PRRSV,无哪个阶段的猪,肺脏深处积液以及血清都是病毒分离最理想的材料,PRRSV在血清中要比在组织中稳定。对于老龄猪,病毒血症可能是一过性的,这时组织中分离到病毒的可能性要大一些。送到实验室的材料,通常应包括新鲜采集的肺、扁桃体以及淋巴结。急性感染猪的血清、肺脏以及支气管肺泡灌洗液较为合适。而对于持续性感染猪,扃桃体、口咽拭子以及支气管肺泡灌洗液比血清和肺脏更合适。对于晚期流产以及早产猪,吸初乳前的弱仔样品比木乃伊胎、流产或死胎样品效果好。感染仔猪群中,弱仔病毒血症的可能性最大,但应注意高滴度的母源抗体可以干扰病毒分离。

2.2 病毒或抗原的检测方法

冰冻切片免疫荧光抗体试验(FA)以及免疫组化试验(IHC)可以检测组织中的PRRSV抗原。冰冻切片的直接免疫荧光抗试验成本较低并且快速。这两种方法的特异性很高,但相对来说敏感性不够。样本的质量对FA结果影响非常大,所以应该注意采集新鲜的组织,并低温保存。IHC可以检测甲醛同定的组织,比FA的敏感性要高,但更费时而且成本更高。通过组织病理学切片,结合IHC以及FA试验的结果可以对PRRSV感染做出准确的诊断。直接FA试验可以检测新鲜样品或冷冻样品,用于IHC的组织应在10%中性缓冲甲醛中同定,组织样品最好采集心、肾、肺、淋巴结、脾脏、胸腺以及扁桃体,PRRSV抗原在肾上腺、肠道、肝脏或偶尔在脑组织中也能够检测剑。

2.3 分子生物学方法

PCR方法直接检测临床样品中PRRSV的基因组RNA。由于省去了病毒分离的过程,PCR比病毒分离省时得多,敏感性和特异性都非常高。目前针对PRRSV的PCR检测方法报道很多,其中主要是针对ORF7,ORF6或ORFlb。另外也有报道采用更为敏感的巢式PCR方法检测PRRSV。随着PCR技术的发展,也陆续出现了荧光标记的PCR方法,如TaqManTMPCR或分子信标PCR方法用于临床样品中PRRSV的诊断。这些方法比常规PCR方法的特异性更高,但是成本更高。最初PCR用于PRRS诊断的主要检测对象是精液或粪便中的病毒,因为这两种样品采用常规方法诊断比较困难。但是,胎儿组织以及胸腔液也可采用PCR方法。临床样品可以检测肺脏以及血清。PCR方法在PRRS的诊断以及群体监测上可以发挥很大作用,比如用于后备种猪的筛选,持续性感染猪的诊断以及用丁:猪群的净化工作。需要注意的是,不。同的实验室,由于病料的新鲜程度、病料处理方法、实验室的设备条件以及操作人员的技术与经验存在差异,所得到的结果也有可能不同,PCR的结果需要综合其它方法。