一、猪链球菌病介绍
猪链球菌病是由感染溶血性链球菌引起的，此病发病急、病程短、死亡率高，各种年龄和品种的猪都可以发病，临床上常表现为猪急性败血症、脑膜炎、肺炎、淋巴结脓肿、慢性关节炎及心内膜炎等，已成为养猪生产中的常见病和多发病，对养猪业危害很大。
二、案例
某自繁自养猪场内保育猪出现散发的关节肿大和跛脚症状，少数病猪可见倒地抽搐，口吐带血色的泡沫，四肢呈划水状，病程较长者表现消瘦，精神沉郁，患病猪初期体温升高达4l-42℃，食欲废绝，站立困难。
出现临床症状后2d内有死亡现象，发病率约为6%，不用药物治疗的情况下死亡率可达50%。
剖检发现，主要病理变化是以各脏器出血、充血为特征的败血症。喉头、淋巴结、肺等器官出血或者充血，气管、肺内充满泡沫；脑膜有不同程度充血、出血；关节囊内有黄色胶冻样或纤维素性脓性渗出物；心包、胸腔、腹腔有纤维素性渗出物。
笔者采集病料后，进行了病原的分离鉴定与药敏试验，并选用敏感药物进行临床治疗，取得了良好的防控效果，现将诊治方法报道如下：
三、材料与方法
1.材料
无菌采集该猪场病死猪心脏、肺脏、大脑等组织进行实验室检测。微量生化鉴定管和药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司，胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司，胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)购自于海博生物，胰蛋白大豆肉汤TSB购自北京希凯创新科技有限公司，TaqDNA Polymerase dNTPs、Trans 2K DNA Marker均购自北京全式金生物有限公司，其它常规试剂均为分析纯。小白鼠购自江西医学院实验动物中心。
2.细菌分离培养
将无菌采集的死亡猪心脏、肺脏、大脑病料分别接种子含5%小牛血清的TSA平板和10%兔血琼脂平板，37℃烛缸培养24h；观察菌落形态、溶血性以及单个菌落的革兰氏染色镜检结果。对疑似猪链球菌的菌落挑出接种到新的TSA平板上纯化培养。
3.生化试验
用接种环将TSA培养基上生长纯化的细菌接种到生化微量发酵管中，37℃条件下培养24h后观察结果。生化试验参考《常见细菌系统鉴定手册》翻提出的方案。
4.分离菌株PCR鉴定
参照文献设计猪链球菌16SrRNA引物。上游引物Pl:5'-GCAGCGTArITCTGTCAAACG-3'，下游引物P2:5'-CCATGGACAGATAAAGATGG-3'，扩增片段理论长度为688bp。引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。采用煮沸方法提取细菌DNA模板。反应体系(25uL体系)：l0×PCRBuffer2.5u.L，dNTPs(10umol/L)1uL，上游引物(10pmol/uL)1uL，下游引物(10pmol/uL)1uL，TaqDNA聚合酶(5U/puL)0.25uL，DNA模板luL，ddH2018.25uL。反应条件：94℃预变性5min;94℃45s，57℃45s，72℃30s，35个循环；72℃延伸10min。PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。
5.动物试验
将小白鼠随机分为3组，2组试验组，1组对照组，每组5只。试验前小白鼠均饲养3d以证实健康方可使用。试验组和对照组小白鼠腹腔分别接种分离菌血清肉汤培养物和血清肉汤，皆为0.2mL。应用平板稀释法计数，每只小鼠腹腔接种2xl08CFU。隔离饲养观察，对死亡小鼠进行回归试验。
6.药敏试验
按K-B药敏纸片的方法，选用14种常见药物对分离菌株进行药敏试验。
