为中国养猪业挽回巨额经济损失!这个疫苗很关键…..

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所属分类:猪病防治

伪狂犬病是一种急性传染病,对养猪业危害极大,疫苗免疫是防控猪伪狂犬病的主要手段。

  自2011年以来的变异毒株的出现,又为我国伪狂犬病的防控带来新的困难,也给伪狂犬的净化带来了新的挑战,但新的变异株疫苗的研发和上市或将改变当前困扰的局面。

伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的猪和多种家畜共患的一种急性传染病,对养猪业危害极大,疫苗免疫是防控猪伪狂犬病的主要手段。
当前欧美和亚洲部分发达国家已经通过疫苗免疫、检测淘汰、扑杀等措施净化和根除了伪狂犬病,其中疫苗在过程中起到了关键作用。我国通过伪狂犬疫苗的运用也长期稳定控制了伪狂犬病,并逐渐走向净化。但自2011年以来的变异毒株的出现,又为我国伪狂犬病的防控带来新的困难。

为中国养猪业挽回巨额经济损失!这个疫苗很关键.....

2011年以来中国新型猪伪狂犬病发病分布图

近年来中国 PR流行区域主要集中在东北、华中、华北、华东及华南地区,涉及沿海地区或近沿海地区17个省份(直辖市),且多数为养猪密集区。由于疫情涉及到很多已常规免疫PRV活疫苗的规模化猪场,因此人们推测流行毒株可能已经发生变异,导致部分疫苗株缺乏对PRV变异毒株的保护力。

我国科学家开发多个毒株疫苗稳定伪狂犬病

在我国,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所于1979年引进了Bartha-K61弱毒株,试制成功了伪狂犬弱毒冻干疫苗。通过Bartha-K61疫苗应用有效遏制住了猪伪狂犬病疫情,为中国养猪业挽回了巨额经济损失。

20世纪90年代初,我国学者从发病猪中分离、鉴定和筛选出了一株免疫原性强的猪伪狂犬病毒鄂A株(Ea),制备成油乳剂灭活疫苗,临床上较好地防控了由猪伪狂犬病毒引起的母猪繁殖障碍和新生仔猪的死亡。
2003年,华中农业大学以鄂A株病毒为亲本,通过基因工程技术缺失,构建了带有LacZ基因伪狂犬病病毒TK/gG双基因缺失HB-98株,制成活疫苗。后华中农业大学又以猪伪狂犬病毒鄂A株(Ea)为母本,通过基因工程技术构建了gE-/gI-/Tk-三基因缺失HB-2000株,制成弱毒活疫苗。

还有郭万柱等(1999)以PRV 闽A株(PRV Fa株)(该毒株是上世纪80年代从牛体分离的一个强毒株)为亲本株,构建了三基因缺失株gE-/gI-/Tk-,并将其制成猪伪狂犬基因缺失活疫苗SA215。

使用有效的疫苗使得伪狂犬病很长一段时间在我国被稳定地控制住。

变异株出现,疫苗免疫保护效果受影响

但自2011年10月以来,猪伪狂犬病又开始在不同地区暴发流行,一些免疫过伪狂犬疫苗猪场爆发新的伪狂犬病,中大猪、母猪出现典型的伪狂犬症状并死亡。很快,重新暴发的伪狂犬病从华北开始蔓延至全国,养殖业再次遭受严重的影响。业界内开始对其关注和反思:伪狂犬病毒是否发生变异?传统疫苗还能不能提供有效保护?诸多疑惑困扰着养猪人。

2012年,国家兽用药品工程技术研究中心与普莱柯生物工程股份有限公司在SCI上首家报道伪狂犬变异毒株。并详细阐述了PRV变异株已开始在我国北方暴发,感染猪群出现高热(40-42℃)、厌食、咳嗽、颤抖、腹泻、神经症状等,育肥猪死亡率可达10-30%。此次大量的感染猪场在出现疫情前已做过伪狂犬疫苗免疫,但仍有伪狂犬感染情况发生,说明早期经典株疫苗无法有效防控变异毒株的感染。

国内多个研究机构先后分离到了“变异毒株”(如:2012年分离的毒株有HN1201株、TJ株、HeN1株、JS株、ZJ01株;2013年分离毒株SD2013株;2014年分离毒株SDYC-2014株等),通过对新分离的伪狂犬变异毒株进行测序,并与经典毒株基因序列对照,证实这些变异株相互之间同源性(97.1%-99.5%)较高,而与经典PRV毒株亲缘关系则相对较远(96.6-99.1%)。
变异毒株形成了1个相对独立的分枝,首次表明PRV分离株可分为2个基因型,中国新流行毒株属于基因Ⅱ型,其他PRV毒株(如欧美分离株)属于基因Ⅰ型(图2),这一发现也解释了为什么Bartha-K61疫苗(Ⅰ型)对中国新流行毒株(Ⅱ型)缺乏有效保护。

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基于 PRVgC 基因的系统发育及分子分型

伪狂犬疫苗免疫效果还需要科学的评价方法

除了毒株,科学有效的评价方法也是保证伪狂犬疫苗免疫效果的重要一环。伪狂犬疫苗的科学评价通常采用检测ELISA抗体和中和抗体两种方法进行评价。

1、通过ELISA方法检测伪狂犬gE和gB抗体
由于伪狂犬疫苗大部分都缺失伪狂犬gE毒力基因,而伪狂犬野毒中含有gE毒力基因,因此,可以通过伪狂犬病gE抗体ELISA 方法鉴别诊断猪群中伪狂犬野毒的感染状态。若免疫疫苗后伪狂犬gE抗体阳性率逐渐下降,则说明疫苗免疫效果好,反之说明免疫效果较差。伪狂犬gBELISA 方法主要用于评价疫苗免疫后的免疫效果。在选择商品化的伪狂犬ELISA 抗体检测试剂盒时,对于gE抗体的检测建议选择敏感性高的,这样伪狂犬野毒感染后能够快速检测出gE抗体,如IDEXX公司生产的猪伪狂犬gE抗体ELISA检测试剂盒。对于gB抗体的检测则建议选择与疫苗免疫保护相关性高的gB抗体检测试剂盒,如BioChek公司或普泰公司生产的伪狂犬gBELISA抗体检测试剂盒。

2、通过中和实验检测伪狂犬的中和抗体
根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免疫学实验称为中和实验。凡能与病毒结合,使其失去感染力的抗体都被称为中和抗体。病毒可刺激机体产生中和抗体,中和抗体与病毒结合后可使病毒失去吸附细胞的能力,从而丧失感染力。
检测伪狂犬疫苗免疫后产生的中和抗体是目前公认的评价伪狂犬疫苗免疫效果最有效的评价方法。伪狂犬疫苗免疫后产生的中和抗体越高,中和伪狂犬野毒的能力就越强,免疫效果越好,反之,免疫效果就差。

变异株疫苗上市或打开伪狂犬防控、净化新局面

为深入落实《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020)》有关要求,实现重点动物疫病防治目标,国家动物疫病防控中心以《规模化养殖场主要动物疫病净化和无害化排放技术集成与示范项目》为抓手,继续推进动物疫病净化工作。以场为单位的几个单病种净化技术路线已经逐渐完善,从单场净化上升到区域净化已具备条件。

虽然毒株的变异为我国伪狂犬病防控形势带来了一些变化,也给伪狂犬的净化带来了新的挑战,但新的变异株疫苗的研发和上市或将改变当前困扰的局面。2012年,国家兽用药品工程技术研究中心优选出一株细胞适应性好、致病力强、免疫原性好的伪狂犬病毒HN1201株,利用基因重组技术,成功构建出gE基因缺失的伪狂犬病毒HN1201-ΔgE株。并以该毒株为基础在国内率先研制成功了首个针对伪狂犬变异毒株的基因工程灭活疫苗“普伪净”。

“普伪净”采用流行毒株为抗原,抗原含量高(不低于108.5TCID50),猪只免疫接种后可产生高水平的中和抗体,可对流行毒株引发的伪狂犬病起到完全保护效果。
该疫苗毒株采用基因工程技术缺失gE基因,可通过gE-ELISA试剂盒进行鉴别诊断,将为当前猪场变异伪狂犬病的防控和净化提供新的有力武器。
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